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真空冷凍幹燥技術在培養基凍幹中的應用

 更新時間:2024-08-21 點擊量:693

細胞培養(yang) 技術對人類社會(hui) 的影響是不可估量的。近年來生物學的進步在很大程度上依賴於(yu) 細胞培養(yang) 技術。此外,基於(yu) 細胞培養(yang) 的實用技術在各個(ge) 領域得到了發展,包括新藥的療效和毒性評估、疫苗和生物製藥的製造以及輔助生殖技術。隨著體(ti) 細胞重編程最近在技術上變得可行,世界各地的研究人員正在激烈競爭(zheng) 再生醫學發展的地位。同樣,在這一領域,細胞培養(yang) 技術也被視為(wei) 進一步發展和普及的基礎。

細胞培養技術中最重要的因素是培養基,如最小基本培養基(MEM)、Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)、DMEM-f-12培養基和RPMI培養基,這些培養基不僅對細胞代謝、氧化還原狀態和一些信號轉導通路有著深遠影響,對細胞形態和分化也有著極大影響。培養基維持細胞存活和增殖,以及細胞功能,這意味著培養基的質量直接影響研究結果、生物製藥生產率和輔助生殖技術的治療結果。因此,對於從事細胞培養工作的研究人員來說,選擇適合其目標的合適培養基至關重要。在某些情況下,研究人員應該自己調整培養基的成分。此外,當遇到問題時,研究人員必須了解介質的特性,以便確定實驗出現問題的原因。

在研發這些培養(yang) 基時,其主要目的是確保以低成本實現高細胞增殖率和生物量生長,並避免頻繁補充營養(yang) 物質。目前,根據添加的補充劑類型,合成培養(yang) 基可分為(wei) 幾種,例如,含血清培養(yang) 基、無血清培養(yang) 基、無蛋白培養(yang) 基和化學成分明確的培養(yang) 基。含血清的培養(yang) 基含有各種血清衍生物質,這使得培養(yang) 基成分不明確,其濃度可能因批次而異。這種情況使培養(yang) 結果的可重複性降低,並存在微生物汙染的風險。然而,含血清的培養(yang) 基可以很容易地配製出來,並有效地用於(yu) 各種細胞類型,因為(wei) 血清含有大量的活性物質,這些活性物質是動物細胞存活和生長所必需的。相比之下,無血清培養(yang) 基具有確定的成分,從(cong) 而實現結果的高可重複性,並且培養(yang) 過程可以得到驗證。此外,如果培養(yang) 條件配置為(wei) 有益於(yu) 靶細胞,則可以在混合細胞群中選擇性地生長靶細胞。在無血清培養(yang) 基中,無蛋白培養(yang) 基(不含任何蛋白質)和化學成分明確的培養(yang) 基(不含任何未定義(yi) 成分)的亞(ya) 組為(wei) 培養(yang) 係統提供了額外的穩定性和可重複性,有助於(yu) 識別細胞分泌物並降低微生物汙染的風險。然而,無血清培養(yang) 基很難設計:迄今為(wei) 止,隻有特定的細胞類型以這種方式培養(yang) 。

目前,用於(yu) 細胞培養(yang) 的常用培養(yang) 基配方已上市。因此,有些研究人員在使用培養(yang) 基時一般不會(hui) 了解其詳細信息和背景,特別是關(guan) 於(yu) 其開發的基本原理、確切成分以及這些培養(yang) 基適合的細胞類型。


每種基礎培養(yang) 基都是根據細胞類型、來源(動物種類)和培養(yang) 目的在每種情況下設計的。事實上,培養(yang) 基成分可能會(hui) 有很大差異。例如,MEM(由Eagle開發)是在有血清補充劑的假設下設計的,因此僅(jin) 包含限度的必要成分(無機鹽、糖、必需氨基酸和水溶性維生素)。相比之下,用於(yu) 無血清培養(yang) 的培養(yang) 基199和Ham's F-12含有各種其他成分。研究人員可以在實驗比較後選擇幾種培養(yang) 基。MEM、DMEM或Ham的F-12通常用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ;懸浮細胞一般選擇RPMI 1640培養(yang) 基;用於(yu) 無血清培養(yang) 的混合培養(yang) 基,如DMEM/F-12。


建立無血清培養(yang) ,使用無血清培養(yang) 係統時,有兩(liang) 點需要注意。首先,在傳(chuan) 代培養(yang) 過程中,可以在培養(yang) 容器中選擇非預期的細胞克隆,因為(wei) 無血清培養(yang) 基比含血清培養(yang) 基更能促進特定細胞克隆或細胞亞(ya) 型的增殖。其次,無血清培養(yang) 基中的雜質,無論是可避免的還是不可避免的,可能比含血清培養(yang) 基對培養(yang) 細胞的影響更大。此外,無血清培養(yang) 還有其他注意事項,即盡量減少胰蛋白酶的濃度和粘附因子。


4-(2-羥1乙1基)-1-呱1嗪乙磺酸(HEPES)具有很強的緩衝(chong) 能力,在培養(yang) 基中可能具有緩衝(chong) 作用。特別是當培養(yang) 的細胞在二氧化碳培養(yang) 箱外處理時,使用HEPES的培養(yang) 基的pH值比僅(jin) 使用碳酸氫鹽的培養(yang) 基更穩定。它也可能對高細胞密度的培養(yang) 有益,例如,當pH值由於(yu) 代謝物(如乳酸)的積累而迅速下降時。對於(yu) 缺乏血清緩衝(chong) 能力的無血清培養(yang) 基,HEPES的pH緩衝(chong) 作用可能更為(wei) 重要。然而,HEPES可能對某些類型的細胞產(chan) 生負麵影響,例如雞胚骨骺軟骨細胞和小鼠胚胎幹細胞(ES 細胞)。研究還表明,在培養(yang) 基暴露於(yu) 可見光期間,含有HEPES的培養(yang) 基會(hui) 產(chan) 生更高水平的細胞毒性產(chan) 物,主要是過氧化氫。

酚紅作為(wei) pH指示劑添加到培養(yang) 基中,有時會(hui) 影響細胞的增殖並顯示出雌激素活性。因此,測試酚紅的這些特性是否會(hui) 影響他們(men) 的細胞和經驗結果,尤其是當涉及雌激素敏感細胞(如乳腺細胞)時。


介質的汙染,不明來源的異物可能會(hui) 汙染培養(yang) 基,從(cong) 而可能影響實證結果。通常,這些汙染物包括病毒、細菌、支原體(ti) 和內(nei) 毒素。然而,還有其他類型的汙染物,如增塑劑,可能會(hui) 從(cong) 塑料器械中洗脫出來,這些物質也會(hui) 影響培養(yang) 物中的細胞。因此,研究人員可以考慮嚴(yan) 格采用無菌技術,並謹慎選擇培養(yang) 器械。在某些特殊情況下,建議在使用前立即用培養(yang) 基清洗儀(yi) 器。


培養(yang) 基凍幹粉應用在製備皮膚修複、抗皮膚衰老、修複皮膚氧化應激損傷(shang) 和修複皮膚紫外線損傷(shang) 的產(chan) 品中,產(chan) 品包括藥物、護膚品或化妝品。通過添加凍幹保護劑將含有大量幹細胞分泌物質的條件培養(yang) 基冷凍幹燥成固體(ti) 粉末,穩定細胞因子性質,使其能發揮最大的功效,特別是添加海藻糖除了能夠作為(wei) 凍幹保護劑,保護條件培養(yang) 基中細胞因子的活性,同時海藻糖本身具有抗氧化作用,延緩細胞衰老。

傳(chuan) 統用於(yu) 外周血淋巴細胞染色體(ti) 製備采用的培養(yang) 基一般為(wei) 在液體(ti) 狀態的基礎培養(yang) 基(如RPMI1640)的基礎上添加一定量血清和植物血球凝集素(PHA)而成。利用PHA對處於(yu) Gtl期的淋巴細胞的刺激作用,使之進入分裂周期,從(cong) 而能進行染色體(ti) 核型分析。但液體(ti) 狀態的淋巴細胞培養(yang) 基不利於(yu) 室溫下存放,其包含的活性物質如穀氨酰胺、PHA等易失活。即使在2-8℃低溫存放一段時間後培養(yang) 基,培養(yang) 的淋巴細胞中可進行核型分析的處於(yu) 分裂相數目顯著下降。利用凍幹技術製備培養(yang) 基凍幹粉是解決(jue) 上述問題的方法。但到目前為(wei) 止,並沒有發現太多提供具體(ti) 的培養(yang) 基凍幹工藝或方法的公開報道。



富睿捷培養(yang) 基凍幹

實驗樣本:培養(yang) 基

實驗目的:去除所有水分,凍幹成粉末

實驗設備:米兰免费网站大全下载Venues2501


真空冷凍幹燥技術在培養(yang) 基凍幹中的應用

實驗過程:

1.打開凍幹機預冷。

2.將樣品分裝到合適的容器內(nei) 預凍。

3.將預凍好的樣品放入透明倉(cang) 內(nei) ,啟動凍幹機。

4.凍幹結束後,釋壓取出凍幹好的樣品,儲(chu) 存或者進行後續實驗。

實驗結果:凍幹前後對比圖

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